经皮经腔旋股内动脉结扎术———一种股骨头坏死造模新技术

目的 探讨端粒酶靶向的小干扰RNA标记探针在肿瘤活体靶向显像的应用价值。方法 常规培养肝细胞癌HepG2肿瘤细胞,接种于裸鼠右侧腋下以建立肝癌裸鼠模型。化学合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)靶向的小干扰RNA(siRNA)探针,使用双功能螯合剂NHS-MAG3构建^99mTc标记的siRNA。将标记探针直接加入细胞培养液后,在孵育10min、0.5h、1h、2h、4h、6h时收集培养基和贴壁细胞,分别测定培养基和HepG2细胞的放射性活度,以评价RNA标记探针的肿瘤细胞分布动力学。将7.4MBq(200μCi)RNA探针经裸鼠尾静脉注入体内,并分别于注射后0.5、1、3、6h进行SPECT显像。在肿瘤和对侧正常组织部位勾画感兴趣区,记录相应区域的放射性计数,并计算各个时间点的肿瘤与对侧的T/NT比值。结果 当^99mTc标记反应体系中加入1μg/μlSnCl₂·2H₂O 室温反应1h时,NHS-MAG3与siRNA 的偶联产物其^99mTc标记率为(73.4±3.0)%。标记产物经Sephadex G25 纯化后其放化纯度最高达98.9%,比活度达25.9GBq/μmol。将HepG2细胞接种于裸鼠皮下继续饲养4周左右形成明显瘤块。HepG2细胞对标记RNA 探针的摄取均随时间延长而不断增加。其摄取率在10 min、0.5h、1h、2h、4h、6h时分别为(0.5±0.1)%、(0.7±0)%、(4.1±1.1)%、(19.1±1.4)%、(24.2±0.9)%、(32.9±1.5)%。注射hTERT靶向探针后,随着时间延长全身本底的放射性逐渐降低。肿瘤在注射后很短时间即可显示,而且随时间增加逐渐清晰,在注射后6h时显像最为清晰。注射hTERT 靶向探针0.5、1、3、6h后,肿瘤与对侧同等面积区域的放射性T/NT比值分别为2.68 ±0.21、2.92 ±0.31、4.96 ±0.44、5.86±0.30,呈现不断增加趋势,在6h达到最大。结论 端粒酶靶向的siRNA 标记探针具有肿瘤体内靶向显像的潜在应用价值。