| 摘 要： | 目的:通过汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对4种HBV启动子的影响研究,进一步探讨汗衣台抑制HBV病毒复制的可能机制。方法:采用CCK8法检测古伦宾、非洲防己碱对Hep G2细胞的增殖毒性,以确定它们的安全浓度;人工合成法、基因扩增法分别构建经典型和突变型的4种HBV启动子(S1p,S2p,Cp,Xp)调控的含荧光素酶报告基因的表达重组质粒(p Cp-Luc,p S1p-Luc,p S2p-Luc,p Xp-Luc),脂质体转染Hep G2细胞8h后,分别加入不同安全浓度的古伦宾、非洲防己碱进行干预处理,于24h、48h结束干预后进行双荧光素酶检测。结果:古伦宾对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16. 4%)、轻度(10. 0%)、重度(20. 2%,p=0. 298)、明显抑制(8. 9%,p=0. 047);非洲防己碱对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16. 8%)、中度(17. 7%)、重度(25. 2%,p=0. 199)、明显抑制(8. 6%,p=0. 05);阳性对照干扰素组对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(15. 1%)、重度(22. 3%)、重度(24. 0%)和中度抑制(6. 2%);拉米夫定对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为重度(20. 7%)、中度(13. 4%)、中度(12. 1%)和明显抑制(9. 9%,p=0. 046)。基因扩增法构建的4个HBV启动子S1p,S2p,Cp,Xp分别有1,1,4,4个突变点,突变后的启动子转录效率提高1. 3倍～2. 2倍(48 h组),但是,药物的抑制效率没有按相应比例提高,从这一角度来看,古伦宾、非洲防己碱、干扰素和拉米夫定对突变启动子的抑制作用除对Xp有明显提高外(2. 3倍～3. 5倍),对其余突变启动子均无明显变化甚至抑制作用下调(1/10～2/5)。结论:汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对经典型和突变型的4种HBV启动子Cp,S1p,S2p,Xp均有不同程度的抑制作用,与干扰素和拉米夫定类似。四种药物对Xp尤其是突变型Xp有明显抑制作用,其中以干扰素最显著,提示汗衣台除了通过抑制启动子活性抗HBV以外,可能还通过抑制Xp启动子活性,继而下调X蛋白的表达,从而对HBV相关性肝癌的发生有预防作用。
|
