| 咪唑啉受体抗血清选择性蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 王勃,刘莹,柳晓兰,孙启鸿,从玉文,李锦.咪唑啉受体抗血清选择性蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备[J].军事医学科学院院刊,2007,31(5):423-426. |
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| 作者姓名： | 王勃 刘莹 柳晓兰 孙启鸿 从玉文 李锦 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院毒物药物研究所
2. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的:表达和纯化咪唑啉受体抗血清选择性蛋白(imidazoline receptor antiserum-selected protein,IRAS protein),制备IRAS蛋白的单克隆抗体.方法:采用基因重组技术在大肠杆菌表达IRAS蛋白;金属镍螯合的Ni-NTA亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株;以间接ELISA方法筛选分泌特异性IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞;采用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光方法鉴定单克隆抗体的特异性.结果:成功表达并纯化了IRAS重组蛋白,纯度达到95%.共筛选出5株分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了IRAS的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体效价分别为1∶ 8×106,1∶ 2×106和1∶ 5×106,属于IgG1亚型.该抗体能与原核及真核系统表达的IRAS重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光显示IRAS蛋白主要定位于细胞质中.结论:建立了稳定分泌IRAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,成功制备了特异性好的IRAS单克隆抗体,为研究IRAS的功能提供了有力的研究工具.
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| 关 键 词： | 咪唑啉受体抗血清选择性蛋白 单克隆抗体 蛋白质表达 纯化 咪唑啉受体 抗血清 选择性 重组蛋白 表达 纯化 单克隆抗体制备 Expression monoclonal antibody preparation protein 研究工具 功能 稳定 细胞质 定位 荧光显示 间接免疫 特异性反应 发生 |
| 文章编号： | 1000-5501（2007）05-0423-04 |
| 修稿时间： | 2007-03-06 |
Expression, purification of IRAS protein and preparation of its monoclonal antibody |
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| WANG Bo,LIU Ying,LIU Xiao-Lan,SUN Qi-Hong,CONG Yu-Wen,LI Jin.Expression, purification of IRAS protein and preparation of its monoclonal antibody[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2007,31(5):423-426. |
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| Authors: | WANG Bo LIU Ying LIU Xiao-Lan SUN Qi-Hong CONG Yu-Wen LI Jin |
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| Institution: | 1. Institute of Pharmacology and Toxicology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850,China;2. Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | imidazoline receptor antiserum-selected protein monoclonal antibody protein expression purification |
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