| RNA干扰对成肌细胞系L6中FOXO3a基因表达的影响 |
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| 引用本文： | 丁 洁,梁炳生,达志峰,朱志祥,韦 建,贾英伟,冯 勇. RNA干扰对成肌细胞系L6中FOXO3a基因表达的影响[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(33): 5974. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.33.012 |
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| 作者姓名： | 丁 洁 梁炳生 达志峰 朱志祥 韦 建 贾英伟 冯 勇 |
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| 作者单位： | 1山西医科大学,山西省太原市 030001;2山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市 030001;3上海市第六人民医院骨科,上海市 200030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学青年基金(81000805),课题名称：联合MuRF1与FOXO3a基因治疗延缓失神经肌萎缩的实验研究。 |
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| 摘 要： | 背景：最近的研究发现,一些因子在失神经骨骼肌萎缩的过程中发挥关键性作用,其中“feak-headbox”(Foxo)转录因子是调控骨骼肌萎缩最关键的分子。目的：探讨RNA干扰技术体外抑制FOXO3a基因表达的效果。方法：6孔细胞培养板中培养大鼠成肌细胞系L6,使用pEGFP-N1与siRNA重组质粒等比例在Lipofectamine2000介导下转染,优化与检测系统的转染效率;将2 μg FOXO3a基因siRNA重组质粒转染L6,转染48 h与72 h。结果与结论：①pEGFP-N1与siRNA重组质粒转染后48 h,荧光显微镜下可见细胞中有大量明亮的绿色荧光表达,显示系统有较高的转染效率。②实时定量PCR分析结果显示,转染后48 h和72 h,干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a mRNA的抑制率与未转染对照组相比差异均有显著性意义(P < 0.05),转染72 h与48 h相比,抑制效应更为明显,并以FOXO3a-Ⅰ的抑制效果最为明显。③Western印迹灰度分析结果显示,转染后48 h和72 h,干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a蛋白表达的抑制率与对照组相比差异有显著性意义(P < 0.05),转染72 h与48 h相比,抑制效应更为明显,与mRNA水平的影响一致。结果可见RNA干扰技术在体外能够明显抑制叉头蛋白转录因子FOXO3a基因的表达,FOXO3a基因siRNA重组质粒转染其干扰序列对FOXO3a的mRNA和蛋白抑制效果尚不明确,这可为RNA干扰介导的失神经骨骼肌萎缩基因治疗提供一种新的思路。
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| 关 键 词： | 组织构建 组织构建细胞学实验 肌萎缩 FOXO3a L6 失神经 RNA干扰 基因表达 国家自然科学基金 |
| 收稿时间： | 2013-02-06 |
RNA interference affects the feak-headbox 3a gene expression in myoblast cell line L6 |
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| Ding Jie,Liang Bing-sheng,Da Zhi-feng,Zhu Zhi-xiang,Wei Jian,Jia Ying-wei,Feng Yong. RNA interference affects the feak-headbox 3a gene expression in myoblast cell line L6[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(33): 5974. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.33.012 |
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| Authors: | Ding Jie Liang Bing-sheng Da Zhi-feng Zhu Zhi-xiang Wei Jian Jia Ying-wei Feng Yong |
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| Affiliation: | 1Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; 2Department of Orthopedics, the Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; 3Department of Orthopedics, 6th Hospital of Shanghai, Shanghai 200030, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tissue construction cytology experiment in tissue construction muscle atrophy feak-headbox 3a L6 denervation RNA interference gene expression National Natural Science Foundation of China |
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