新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后骨髓基质细胞移植时间的选择

目的:众多研究已证实骨髓基质细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤是有效的,但移植时间点的选择尚无定论.在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间点进行骨髓基质细胞移植,通过对其远期行为学及组织学检测,探讨最佳的移植时间窗.方法:实验于2005-06/2006-06在中南大学湘雅医院中心实验室完成.①动物:选取清洁级7 d龄SD大鼠50只,随机数字表法分为5组:正常对照组、模型对照组、24 h,72 h,7 d细胞移植组,10只/组.另取4周龄SD大鼠10只用于骨髓基质细胞的培养.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:除正常对照组外,其余组大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型.在脑立体定位仪下,24 h,72 h,7 d细胞移植组分别于造模后对应时间点,将体外培养3~5代且经Hochest33324标记24 h的鼠骨髓基质细胞2 μL脑内移植于左侧海马,约105个细胞.③实验评估:各组大鼠40 d日龄时进行迷宫觅水测试,记录觅水时间、错误次数、重复次数.行为学测试后取脑组织片行尼氏染色,计数左侧海马CA1区神经元数.在荧光显微镜下观察骨髓基质细胞的存活、增殖,用免疫组化法检测骨髓基质细胞神经元特异性烯醇化酶的阳性率.结果:50只大鼠均进入结果分析.①放射臂迷宫实验检测:模型对照组觅水时间、错误次数、重复次数均高于正常对照组和各细胞移植组（P < 0.01）,24 h细胞移植组上述3项指标均低于72 h,7 d细胞移植组（P < 0.05）.②左侧海马CA1区神经元尼氏染色结果:模型对照组神经元数较正常对照组明显减少（P < 0.01）,且排列紊乱,丢失明显;24 h,72 h,7 d细胞移植组神经元数均较模型对照组显著增加（P < 0.01）,排列整齐;24 h细胞移植组神经元数较72 h,7 d细胞移植组明显增多（P < 0.05）.③骨髓基质细胞体内增殖和神经分化情况:骨髓基质细胞移植后30~40 d仍可在移植部位及左侧皮质区存活、增殖.24 h细胞移植组左脑神经元特异性烯醇化酶阳性表达率显著高于72 h,7 d细胞移植组（P < 0.01）.结论:新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后24 h接受骨髓基质细胞移植可最大程度改善脑损伤所导致的远期行为学障碍,其机制可能与早期移植可有效减轻神经元的坏死、凋亡,且有利于骨髓基质细胞的迁移、分化有关.

Time window choice for bone marrow stromal cells transplantation in the treatment of hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rats