| 葡萄糖转运蛋白-2逆转录病毒表达载体构建/包装及其鉴定 |
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| 引用本文： | 方芳,凌贤龙.葡萄糖转运蛋白-2逆转录病毒表达载体构建/包装及其鉴定[J].第三军医大学学报,2010,32(11). |
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| 作者姓名： | 方芳 凌贤龙 |
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| 作者单位： | 第三军医大学新桥医院消化内科,重庆,400037 |
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| 摘 要： | 目的 构建葡萄糖转运蛋白-2(glucose transporter-2,GLUT-2)基因逆转录病毒表达载体及其稳定产毒细胞系,为新型"人工胰岛β细胞"的构建奠定基础.方法 质粒pCB7/GLUT2经EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,克隆至逆转录病毒载体PLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体pL-GLUT2-SN,经酶切及测序鉴定;转pL-GLUT2-SN至包装细胞系PA317,G418抗性筛选,检测上清病毒滴度,挑选滴度较高的稳定产毒细胞克隆行PCR及RT-PCR鉴定.结果 建立GLUT-2基因逆转录病毒表达载体pL-GLUT2-SN,经酶切及测序证实目的基因插入位点及读码框架正确;所建稳定产毒细胞克隆PA317/GLUT2,其最高病毒滴度达7.1×105 CFU/ml,PCR及RT-PCR证实GLUT-2基因整合入其中并稳定表达.结论 成功构建GLUT-2基因逆转录病毒表达载体及其稳定产毒细胞系,为"人工胰岛β细胞"的构建奠定了基础.
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| 关 键 词： | 葡萄糖转运蛋白-2 逆转录病毒载体 PA317细胞 包装 鉴定 |
Construction of retrovirus expression vector containing GLUT-2 gene and its identification |
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| Fang Fang,Ling Xianlong.Construction of retrovirus expression vector containing GLUT-2 gene and its identification[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2010,32(11). |
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| Authors: | Fang Fang Ling Xianlong |
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