SARS-CoVS蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究 |
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作者姓名: | 肖宇 倪兵 李晋涛 李艳秋 黎万玲 王希良 姜曼 吴玉章 |
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作者单位: | [1]解放军第三军医大学免疫学研究所.重庆市400038 [2]军事医学科学院微生物与流行病学研究所,北京市100071 |
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摘 要: | 目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoV S1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染Vero E6细胞,用Western检测S蛋白的表达。结果:PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段,两片段插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染Vero E6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoVs蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。
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关 键 词: | SARS-CoVS蛋白 全长基因 克隆 SARS病毒 基因疫苗 严重急性呼吸综合症 |
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