| 抑制性消减杂交技术筛选NS5ATP13 蛋白的上调基因 |
| |
| 引用本文： | 党晓燕,成军,邓红,王建军,王春花,纪冬,张黎颖. 抑制性消减杂交技术筛选NS5ATP13 蛋白的上调基因[J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2004, 13(1): 39-42 |
| |
| 作者姓名： | 党晓燕 成军 邓红 王建军 王春花 纪冬 张黎颖 |
| |
| 作者单位： | 100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 |
| |
| 摘 要： | 目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5ATP13蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，克隆HCV NS5ATP13蛋白反式激活靶基因。方法 以HCV NS5ATP13表达质粒pcDNA3．1(-)-NS5ATPl3转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果 成功构建人HCV-NS5ATPl3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到102个白色克隆，进行菌落PCR分析，其中96个均得到100～1000bp插入片段。挑取40个插入片段测序分析，其中2个cDNA片段为未知序列，通过生物信息学分析获得其全长序列，已被GenBank收录，另有34个为已知功能序列。结论成功筛选出2个新的cDNA序列，并获得其全长序列，可能为HCV NS5ATPl3蛋白反式激活相关靶基因。
|
| 关 键 词： | 抑制性消减杂交技术 NS5ATP13蛋白 反式激活相关基因 cDNA消减文库 生物信息学 丙型肝炎病毒 |
| 修稿时间： | 2003-12-10 |
Screening and cloning of the target genes up-regulated by human gene 13 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus using suppression subtractive hybridization technique |
| |
| DANG Xiaoyan,CHENG Jun,DENG Hong,et al Gene Therapy Research Center. Screening and cloning of the target genes up-regulated by human gene 13 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus using suppression subtractive hybridization technique[J]. Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology, 2004, 13(1): 39-42 |
| |
| Authors: | DANG Xiaoyan CHENG Jun DENG Hong et al Gene Therapy Research Center |
| |
| Affiliation: | DANG Xiaoyan,CHENG Jun,DENG Hong,et al Gene Therapy Research Center,Institute of Infectious Diseases,The 302 Hospital of PLA,Beijing 100039,China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | HCV NS5A protein Transactivation Subtractive hybridization |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
