兔骨髓间充质干细胞体外分离培养及多向诱导分化*

背景：间充质干细胞不仅自身免疫原性弱，还可以调节细胞免疫功能，减轻移植物排斥反应，在组织工程中具有良好的应用前景。但骨髓中间充质干细胞含量稀少，约占单个核细胞的十万分之一到百万分之一。目的：建立一种分离、培养扩增兔骨髓间充质干细胞的方法，观察体外培养骨髓间充质干细胞的生长特性，及其潜在的诱导分化能力。方法：采用灌流法获取兔胫骨骨髓，密度梯度离心法联合贴壁培养法体外纯化扩增，相差显微镜观察其形态学特点，MTT法测定绘制传代骨髓间充质干细胞生长曲线，经成骨诱导液(L-DMEN/F12，体积分数为10%胎牛血清，0.1 μmol/L地塞米松，200 μmol/L抗坏血酸，10 mmol/L β-甘油磷酸钠)、成脂诱导液(L-DMEN/F12，体积分数为10%胎牛血清，1 μmol/L地塞米松，200 μmol/L吲哚美辛，0.5 mmol/L IBMX，10 mg/L胰岛素)、成软骨诱导液(L-DMEN/F12，体积分数为10%胎牛血清，10 μg/L转化生长因子β1，0.1 μmol/L地塞米松，50 μmol/L抗坏血酸，6.25 mg/L胰岛素)体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞分化，并分别经碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色法鉴定。结果与结论：通过密度梯度离心法联合贴壁培养法可在体外大量扩增、纯化骨髓间充质干细胞，所获细胞具有高度自我更新能力和多向分化潜能，原代及传代骨髓间充质干细胞为梭形。经成骨细胞诱导，细胞碱性磷酸酶染色阳性；经成脂肪细胞诱导，细胞内出现红色脂滴，经成软骨细胞诱导，甲苯胺蓝染色阳性。