人FOXP3 cDNA的克隆及在原核细胞中的表达 |
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引用本文: | 王进,刘清泉,张野,徐哲,黄长形.人FOXP3 cDNA的克隆及在原核细胞中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2007,23(7):678-680. |
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作者姓名: | 王进 刘清泉 张野 徐哲 黄长形 |
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作者单位: | 第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,陕西,西安,710038 |
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基金项目: | 教育部留学回国人员科研启动基金;第四军医大学校科研和校改项目 |
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摘 要: | 目的:克隆人FOXP3cDNA,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中表达。方法:从新生儿脐带血获得FOXP3mRNA,用巢式RT-PCR技术扩增FOXP3cDNA,产物纯化后T-A克隆连接至pMD18-T载体,构建其原核表达载体pRSET-A-FOXP3,转化大肠杆菌BL-21(DE3)pLysS,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定。结果:获得FOXP3mRNA,并对其编码区cDNA序列进行扩增。PCR产物连接至原核表达载体pRSET,经DNA测序,证实与Gen-Bank中的人FOXP3编码序列一致。经SDS-PAGE及Western blot显示在相对分子质量(Mr)约为52000处出现融合表达条带,表达量约占菌体蛋白总量的20%。结论:成功地克隆人FOXP3cDNA,构建了其原核表达载体,并在大肠杆菌中得到有效表达。
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关 键 词: | 克隆 原核表达 |
文章编号: | 1007-8738(2007)07-0678-03 |
修稿时间: | 2007-03-12 |
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