MDR1小干扰RNA调节人脑多形性胶质母细胞瘤细胞系BT325的药物敏感性

背景与目的:胶质瘤的治疗一直是困扰着医学界的一大难题,在药物治疗过程中出现的多药耐药是化疗失败的重要原因。其中由MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是关键因素。本实验拟探讨MDR1小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)对人脑多形性胶质母细胞瘤耐药细胞BT325药物敏感性的调节作用。方法:以BT325细胞作为研究对象,设计3条67nt寡核苷酸序列并分为MDR1A组、MDR1B组和MDR1C组,经质粒扩增提取测序,转染于对数生长期的BT325细胞。嘌呤霉素筛选转染siRNA成功的细胞。RT-PCR检测转染前后MDR1mRNA水平。免疫组化和流式细胞仪分析P-gp的表达,对转染后的细胞进行药敏实验。结果:转染后的细胞呈指数倍生长。RT-PCR结果显示,转染MDR1siRNA后,BT325细胞MDRmRNA有不同程度的降低,其中MDR1A组、MDR1B组、MDR1C组分别为0.18±0.05、0.30±0.09和0.36±0.13,而对照组0.76±0.06(P<0.001)。流式细胞仪及免疫组化表明,正常细胞P-gp的表达率为85.73%,而转染组表达率下降至1.44%。药敏实验显示,阿霉素、长春新碱对转染MDR1siRNA的BT325细胞的IC50均有不同程度降低,且出现凋亡峰(P<0.05),MDR1A组、MDR1B组和MDR1C组G0/G1期细胞较正常组分别增加了13.55%、14.53%和1.46%(P<0.05)。结论:MDR1小干扰RNA可以在转录后水平对多药耐药进行调节,使MDR1基因表达下调,提高对药物的敏感性,诱导细胞凋亡。

Regulatory effect of small interfering RNA targeting multidrug resistant protein 1 on chemosensitivity of human multiforme glioblastoma cell line BT325