miR-377对子痫前期胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡和氧化应激的影响及MAPK/ERK信号通路在其中的作用

目的探讨miR-377对子痫前期胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡和氧化应激的影响,分析MAPK/ERK信号通路在其中的作用。方法将培养的HTR-8/SVneo细胞分为4组,分别为对照组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、miR-377模拟物组和miR-377+U0126组。对照组不进行转染;H_(2)O_(2)组以250μmol/L的H_(2)O_(2)作用24 h;miR-377模拟物组和miR-377+U0126组通过脂质体Lipo-fectamine3000将H_(2)O_(2)作用24 h后的HTR-8/SVneo细胞转染miR-377模拟物,miR-377+U0126组转染miR-377模拟物前1 h,加入浓度为20μmol/L的U0126处理HTR-8/SVneo细胞,转染48 h后进行后续实验。应用实时荧光定量PCR检测miR-377的表达,应用CCK-8实验检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况,应用比色法检测HTR-8/SVneo细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,应用酶标法检测HTR-8/SVneo细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,应用Transwell法检测HTR-8/SVneo细胞迁移数量,应用流式细胞仪检测HTR-8/SVneo细胞凋亡情况,应用Western blot检测MEK1/2、ERK1/2、P-MEK1/2、P-ERK1/2蛋白表达。结果miR-377在H_(2)O_(2)组和对照组中的表达量分别为(1.02±0.09)和(0.31±0.04),H_(2)O_(2)组中miR-377的表达量显著低于对照组(t=19.073,P<0.05)。48、72、96 h时,3组HTR-8/SVneo细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移能力明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移能力明显高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞凋亡率明显高于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞凋亡率明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MDA水平明显高于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MDA水平明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中SOD和GSH-Px水平明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中SOD和GSH-Px水平均显著高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平显著高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);与miR-377模拟物组相比,miR-377+U0126组中HTR-8/SVneo细胞迁移能力显著降低,凋亡率和MDA水平显著升高,SOD和GSH-Px水平显著降低(均P<0.05)。结论miR-377通过激活MAPK/ERK信号通路减弱了子痫前期HTR-8/SVneo细胞的凋亡和氧化应激。