| STK15基因RNA干扰真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞侵袭的影响 |
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| 引用本文： | 李晓钟,王晓霞,贺杰峰,裴毅.STK15基因RNA干扰真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞侵袭的影响[J].中国药物与临床,2013(11):1385-1388,I0001. |
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| 作者姓名： | 李晓钟 王晓霞 贺杰峰 裴毅 |
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| 作者单位： | [1]山西省人民医院急诊科,太原030012 [2]山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 ,太原030012 [3]山西医学科学院山西大医院普外科 ,太原030012 [4]山西医学科学院山西大医院老年肿瘤科,太原030012 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（30973401）;山西省自然科学基金（2009011052） |
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| 摘 要： | 目的 构建STK15基因特异的RNA干扰（RNAi）真核表达质粒,将其转染人结肠癌细胞SW480后,观察对STK15基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞侵袭能力的影响.方法 设计并合成能表达小发夹结构RNA （shRNA）的DNA序列,退火后与载体pGPU6/GFP/Neo连接,构建重组表达载体pGPU6/GFP/NeoSTK15 shRNA,转化DH5α菌株后挑选阳性克隆,提取质粒进行序列测定.脂质体介导重组质粒转染人结肠癌SW480细胞,于转染后24h和48 h通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法分别在mRNA和蛋白水平检测STK15基因的表达,并通过细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭能力.结果 测序证实插入pGPU6/GFP/Neo载体的DNA序列、方向和位点均正确.与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15 shRNA质粒转染细胞24h和48 h后,STK15基因的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,且呈现时间依赖性,STK15 mRNA水平分别下调80％和98％,蛋白水平分别下调40％和80％.与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15shRNA质粒转染细胞的侵袭能力分别下降约67％和89％.结论 成功构建了针对STK15基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制STK15基因的表达和细胞的侵袭能力,为进一步研究STK15基因功能以及探讨结肠癌治疗的新途径奠定了基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 结肠肿瘤 真核表达载体 STK15 |
Construction and effects of STK15 eukaryotic expression vector for RNA interference on invasion of human colon cancer cells |
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| LI Xiao-zhong,WANG Xiao-xia HE Jie-feng PEI Yi.Construction and effects of STK15 eukaryotic expression vector for RNA interference on invasion of human colon cancer cells[J].Chinese Remedies & Clinics,2013(11):1385-1388,I0001. |
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| Authors: | LI Xiao-zhong WANG Xiao-xia HE Jie-feng PEI Yi |
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| Institution: | 1.Department of Emergency, Shanxi Provincial People＇s Hospital, Taiyuan 030012, China;) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference Colonic neoplasms Eukaryotic expression vector STK15 |
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