| 葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达 |
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| 引用本文： | 吉晓滨,吕景礼,陈敬贤,刘启才,谢景华. 葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达[J]. 中国耳鼻咽喉头颈外科, 2012, 0(7): 349-353 |
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| 作者姓名： | 吉晓滨 吕景礼 陈敬贤 刘启才 谢景华 |
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| 作者单位： | [1]广州市第一人民医院耳鼻咽喉科,广东广州510180 [2]广州医学院实验医学研究中心,广东广州510182 [3]美国哥伦比亚大学医学院病理与细胞生物系,美国纽约10032 |
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| 基金项目： | 广州市科技局资助项目（2009JI-C501-2） |
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| 摘 要： | 目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法 及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA和MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平的有效表达。稳定表达双基因的293T细胞上清对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖有促进作用,与细胞中SEA的表达和分泌有关。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。
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| 关 键 词： | 葡萄球菌属 超抗原 真核细胞 基因 喉肿瘤 克隆,分子 |
Construction of eukaryotic coexpression vector of recombinant MAGE-A3originating from laryngocarcinoma and Staphylococcal endotoxin A with stable expression of vector in 293T cells |
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| JI Xiaobin,LU Jingli,CHEN Jingxian,LIU Qicai,XIE Jinghua. Construction of eukaryotic coexpression vector of recombinant MAGE-A3originating from laryngocarcinoma and Staphylococcal endotoxin A with stable expression of vector in 293T cells[J]. Chinese Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, 2012, 0(7): 349-353 |
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| Authors: | JI Xiaobin LU Jingli CHEN Jingxian LIU Qicai XIE Jinghua |
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| Affiliation: | 1 Department of Otolaryngology,Guangzhou Municipal First People＇s Hospital,Guangzhou,Guangdong,510180,China;2 Experimental Medicine Research Center,Guangzhou Medical College,Guangzhou,Guangdong,510182,China;3 Department of Pathology and CellBiology,Columbia University,New York,10032,USA) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Staphylococcus Superantigens Eukaryotic Cells Genes Laryngeal Neoplasms Cloning Molecular |
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