| 携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 夏万尧,刘伟,王丹茹,丁文龙,钟梅芳,刘德莉,周广东,崔磊,曹谊林. 携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定[J]. 上海交通大学学报(医学版), 2006, 26(10): 1134-1137 |
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| 作者姓名： | 夏万尧 刘伟 王丹茹 丁文龙 钟梅芳 刘德莉 周广东 崔磊 曹谊林 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室，上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室，上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室，上海交通大学基础医学院人体解剖学教研室，上海交通大学基础医学院人体解剖学教研室，上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室，上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室，上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室，上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室 上海200011，上海200011，上海200011，上海200011，上海200011，上海200011，上海200011 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划基金(“973”项目)(2005CB522702)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞。结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段。与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功。以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中。重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6介导转染293包装细胞出现细胞病变效应(CPE)。采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断。结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 基因重组 腺病毒 转化生长因子β1 |
| 文章编号： | 0258-5898(2006)09-1134-04 |
| 收稿时间： | 2006-03-26 |
| 修稿时间： | 2006-03-26 |
Reconstruction and Identification of Adenovirus Expression Vector for Human Transforming Growth Factor β1 |
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| XIA Wan-yao,LIU Wei,WANG Dan-ru,DING Wen-long,ZHONG Mei-fang,LIU De-li,ZHOU Guang-dong,CUI Lei,CAO Yi-lin. Reconstruction and Identification of Adenovirus Expression Vector for Human Transforming Growth Factor β1[J]. Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science, 2006, 26(10): 1134-1137 |
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| Authors: | XIA Wan-yao LIU Wei WANG Dan-ru DING Wen-long ZHONG Mei-fang LIU De-li ZHOU Guang-dong CUI Lei CAO Yi-lin |
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