| 人β-catenin-EGFP融合表达慢病毒载体构建及在毛囊干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 杨鹏高,胡孝辉,高丰厚,俞为荣,徐 鹏,方 勇.人β-catenin-EGFP融合表达慢病毒载体构建及在毛囊干细胞中的表达[J].上海交通大学学报(医学版),2009,29(9):1030. |
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| 作者姓名： | 杨鹏高 胡孝辉 高丰厚 俞为荣 徐 鹏 方 勇 |
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| 作者单位： | 杨鹏高,胡孝辉,俞为荣,徐鹏,方勇(上海交通大学,医学院第三人民医院,烧伤整形科,上海,201900);高丰厚(上海交通大学,医学院第三人民医院,实验中心,上海,201900) |
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| 摘 要： | 目的 构建人β-连环蛋白(β-catenin)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体,感染人毛囊干细胞并予以鉴定.方法 提取人血管内皮细胞总RNA,RT-PCR扩增获得β-catenin基因全部序列,采用TA克隆技术获取基因亚克隆pUCm-T-β-catenin,AgeⅠ酶切连接pGC-FU载体构建β-catenin融合EGFP共表达慢病毒载体质粒pGC-FU-β-catenin-EGFP.质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经RT-PCR及测序鉴定正确后转染FT293细胞,Western blotting分析鉴定.质粒再转染FT293细胞进行慢病毒质粒包装,荧光显微镜观察,Real-time PCR测定病毒滴度.包装后慢病毒质粒感染体外分离和培养经免疫荧光染色鉴定的人毛囊干细胞,RT-PCR鉴定,荧光显微镜观察感染效率.结果 RT-PCR及测序鉴定证实目的 基因正确克隆至慢病毒载体中.在转染pGC-FU-β-catenin-EGFP的FT293细胞,Western blotting证实细胞表达β-catenin;质粒包装后荧光显微镜观察FT293细胞见大量绿色荧光时测得病毒滴度为2.0×108 TU/mL.在感染慢病毒质粒的人毛囊干细胞,当感染复数为10时,感染后48 h的感染效率可达80%以上,感染后3周的感染效率仍维持在80% ～90%.结论 成功构建β-catenin-EGFP融合表达慢病毒载体,可高效感染人毛囊干细胞且表达稳定、持久.
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| 关 键 词： | 慢病毒 β-连环蛋白 增强型绿色荧光蛋白 人毛囊干细胞 |
Construction of lentivirus vector containing human β-catenin-EGFP and its expression in human hair follicle stem cells |
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| YANG Peng-gao,HU Xiao-hui,GAO Feng-hou,YU Wei-rong,XU Peng,FANG Yong.Construction of lentivirus vector containing human β-catenin-EGFP and its expression in human hair follicle stem cells[J].Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science,2009,29(9):1030. |
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| Authors: | YANG Peng-gao HU Xiao-hui GAO Feng-hou YU Wei-rong XU Peng FANG Yong |
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| Institution: | 1.Department of Burn & Plastics;2.Experiment Center;The Third People's Hospital;School of Medicine;Shanghai Jiaotong University;Shanghai201900;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lentivirus β-catenin enhanced green fluorescent protein human hair follicle stem cells |
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