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| 人His6-IFNγ/TNFβ(His6γ-TNFNβ)融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究 | |
| 作者姓名： | 周晴 马志章 徐建芬 丁仁瑞 余建法 丁鸣 |
| 作者单位： | 杭州大学生命科学学院免疫工程实验室，杭州大学生命科学学院免疫工程实验室，杭州大学生命科学学院免疫工程实验室，杭州大学生命科学学院免疫工程实验室，浙江中医学院，浙江大学生物科学与技术系 杭州310012，杭州310012，杭州310012，杭州310012 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(39670815)资助项目 |
| 摘 要： | 应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni~(2 )-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map. |
| 关 键 词： | 人IFNγ/TNFβ 融合蛋白 分离纯化 |
| 收稿时间： | 1998-07-16 |
| 修稿时间： | 1998-09-20 |
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