重组人神经生长因子β基因腺病毒的构建与鉴定 |
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引用本文: | 柏宏亮,白转丽,王瑞,何佑成.重组人神经生长因子β基因腺病毒的构建与鉴定[J].山西医科大学学报,2014(11):1013-1017,1117. |
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作者姓名: | 柏宏亮 白转丽 王瑞 何佑成 |
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作者单位: | 西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科 |
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摘 要: | 目的 构建表达人神经生长因子β基因片段的重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β。方法 以健康人白细胞中DNA为模板,扩增h NGF-β基因片段,导入p GEM-T-Easy质粒,获得重组质粒p GEM-T/h NGF-β。经酶切鉴定后与复制缺陷型腺病毒穿梭质粒p ACCMV-p Lp A构建重组腺病毒穿梭质粒p ACCMV-h NGF-β。酶切鉴定后再与辅助包装质粒PJM17共转染293细胞,经同源重组后,构建复制缺陷型重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β。对Ad CMV-h NGF-β进行基因鉴定,并测定滴度及在He La细胞中的表达。结果 顺利克隆出h NGF-β基因片段,构建的重组质粒p GEM-T/h NGF-β和重组腺病毒穿梭质粒p ACCMVh NGF-β,经酶切鉴定实际结果与理论推导符合。构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β滴度为1.2×1012pfu/ml,并能在He La细胞中表达。结论 以h NGF-β基因片段为基础成功构建了重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β,测试表明该重组病毒具有高滴度活性和良好的感染人类细胞、表达目的蛋白的能力。
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关 键 词: | 人神经生长因子(h NGF) 基因表达 重组腺病毒 |
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