| 人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定 |
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| 引用本文： | 马靖,裴晓磊,张扬,王应. 人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定[J]. 北京大学学报(医学版), 2014, 46(5) |
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| 作者姓名： | 马靖 裴晓磊 张扬 王应 |
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| 作者单位： | 北京大学基础医学院免疫学系,北京大学人类疾病基因研究中心,卫生部医学免疫学重点实验室,北京100191 |
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| 基金项目： | 国家教育部博士点基金，国家"重大新药创制"科技重大专项，国家自然科学基金(31270915)资助 Supported by the Ph.D.Programs Foundation of Ministry of Education of China，the National Key New Drug Creation Program of China，the National Natural Science Foundation of China |
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| 摘 要： | 目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础.方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMP-myc/His片段,插入pMH3表达载体.利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株.以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性.结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株.镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95％以上且具有生物学活性.结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具.
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| 关 键 词： | PC3-分泌微量蛋白,人 CHO细胞 遗传,重组 基因表达 分离和提纯 |
Expression,purification and functional identification of human PSMP recombinant protein in Chinese hamster ovary cells |
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| MA Jing,PEI Xiao-lei,ZHANG Yang,WANG Ying. Expression,purification and functional identification of human PSMP recombinant protein in Chinese hamster ovary cells[J]. Journal of Peking University. Health sciences, 2014, 46(5) |
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| Authors: | MA Jing PEI Xiao-lei ZHANG Yang WANG Ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PC3-secreted microprotein,human CHO cells Recombination,genetic Gene expression Isolation and purification |
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