| 以大肠埃希菌tolC蛋白为靶标的适配体的筛选及结构分析 |
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| 引用本文： | 陈伶利,李杰,张晓青,宋岚,钱纯,葛金文.以大肠埃希菌tolC蛋白为靶标的适配体的筛选及结构分析[J].北京大学学报(医学版),2014,46(5). |
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| 作者姓名： | 陈伶利 李杰 张晓青 宋岚 钱纯 葛金文 |
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| 作者单位： | 湖南中医药大学医学院,长沙,410208 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，湖南省自然科学基金，高等学校博士学科点专项科研基金，中国博士后基金，湖南省教育厅科学研究项目重点项目，湖南省高校科技创新团队基金，湖南省重点学科基金(100601)资助 Supported by the National Natural Sciences Foundation of China，the National Natural Science Foundation of Hunan;China，the Special Scientific Research Foundation for Doctoral Discipline Area of the Institution of Higher Learning of China，the National Science Foundation for Post-Doctoral Scientists of China，Research Foundation of Education Bureau of Hunan Province;China，Science and Technology Innovative Research Team in Higher Educational Institutions of Hunan Province，the Construct Program of the Key Discipline In Hunan Province |
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| 摘 要： | 目的:筛选大肠埃希菌外排泵tolC蛋白的核酸适配体.方法:重组表达大肠埃希菌外排泵外膜蛋白tolC,利用指数富集的配体系统进化技术(stematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)从单链DNA文库中筛选出一组能够特异性与其结合的核酸适配体.利用FITC荧光素标记技术检测每轮单链DNA文库与靶蛋白的亲和力,直至亲和力的上升趋于饱和,将最后一轮筛选产物克隆测序,并用DNAman软件分析其二级结构.结果:经过12轮筛选,单链DNA文库与靶标蛋白的亲和力趋向稳定,将第12轮筛选产物克隆测序,对获得的23个适配体进行分析.一级结构分析显示23个适配体并无共同的保守序列,但分别有3对和2对适配体序列完全一致.二级结构预测分析表明,茎环结构为适配体主要的结构形式,提示其可能是适配体与tolC蛋白蛋白特异性结合的基础.根据二级结构特点可将23个适配体分为4个家族,其中20号适配体与靶标蛋白亲和力最高.结论:成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合tolC的高亲和力的核酸适配体,为大肠埃希菌耐药干预及机制研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 适体 核苷酸 tolC蛋白 大肠杆菌 抗药性 |
Screening and structure analysis of the aptamer target to Escherichia coli tolC protein |
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| CHEN Ling-li,LI Jie,ZHANG Xiao-qing,SONG Lan,QIAN Chun,GE Jin-wen.Screening and structure analysis of the aptamer target to Escherichia coli tolC protein[J].Journal of Peking University:Health Sciences,2014,46(5). |
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| Authors: | CHEN Ling-li LI Jie ZHANG Xiao-qing SONG Lan QIAN Chun GE Jin-wen |
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| Keywords: | Aptamers nucleotide tolC protein E coli Drug resistance |
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