| 大鼠微管相关蛋白4重组腺病毒载体的构建及在细胞中的表达鉴定 |
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| 引用本文： | 房亚东,徐雪,党永明,郑霁,张西联,张家平,陈渝,张琼,黄跃生. 大鼠微管相关蛋白4重组腺病毒载体的构建及在细胞中的表达鉴定[J]. 第三军医大学学报, 2006, 28(9): 880-882 |
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| 作者姓名： | 房亚东 徐雪 党永明 郑霁 张西联 张家平 陈渝 张琼 黄跃生 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;成都军区总医院普通外科,成都,610083 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划资助项目(“973”项目)(2005CB522601)，国家自然科学基金资助重点项目(30430451)~~ |
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| 摘 要： | 目的构建大鼠微管相关蛋白4(m icrotubu le-ossoc iated prote in 4,MAP4)重组腺病毒载体,并转染新生大鼠体外培养的心肌细胞进行表达和鉴定,为真核表达及有关实验研究提供基础。方法设计1对引物,应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从大鼠心肌细胞总mRNA中扩增出MAP4 cDNA,并将MAP4 cDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle2中,构建pShuttle2-MAP4表达质粒。将此表达质粒扩增纯化酶切获得含有目的片段MAP4 cDNA的表达盒与Ad-eno-X V iru l DNA重组并线性化后转染HEK293T细胞,包装产生大鼠MAP4重组腺病毒。并且转染新生大鼠原代心肌细胞,应用免疫组化的方法进行表达鉴定。结果扩增所得的MAP4 cDNA片段经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序最终确定为大鼠MAP4基因,所得大鼠MAP4重组腺病毒滴度为2.3×108pfu/m l。转染原代心肌细胞48 h后MAP4表达显著增强。结论为研究MAP4的生物学活性及功能的基因治疗提供了基础。
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| 关 键 词： | MAP4 腺病毒 cDNA 微管相关蛋白 |
| 文章编号： | 1000-5404（2006）09-0880-03 |
| 收稿时间： | 2005-12-27 |
| 修稿时间： | 2005-12-27 |
Construction and identification of Rattus norvegicus microtubule-associated protein 4 gene recombinant adenovirus |
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| FANG Ya-dong,XU Xue,DANG Yong-ming,ZHENG Ji,ZHANG Xi-lian,ZHANG Jia-ping,CHEN Yu,ZHANG Qiong,HUANG Yue-sheng. Construction and identification of Rattus norvegicus microtubule-associated protein 4 gene recombinant adenovirus[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2006, 28(9): 880-882 |
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| Authors: | FANG Ya-dong XU Xue DANG Yong-ming ZHENG Ji ZHANG Xi-lian ZHANG Jia-ping CHEN Yu ZHANG Qiong HUANG Yue-sheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | MAP4 adenovirus cDNA microtubule associated protein |
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