α-1,2岩藻糖基转移酶基因35C〉T和682A〉G突变点体外表达的研究

本研究探讨35C〉T和682A〉G突变点对α-1,2岩藻糖基转移酶（FUT1）表达活性的影响。PCR扩增FUT1全长编码序列DNA片段,通过TOPOTA技术连接至表达载体pcDNA3.1/V5-His,获取目的重组质粒。采用脂质体转染方法将重组质粒转染COS-7细胞,经G418筛选培养后,利用流式细胞术分析细胞表面H抗原,实时荧光PCR检测fut1 mRNA表达情况。结果表明：成功获取了35T、682G＋35T和682A＋35C重组质粒。转染2天后H抗原在COS-7细胞膜上表达,第4天达最高峰。与野生型（682A＋35C）转染的细胞相比,第4天重组质粒（682G＋35T）转染细胞H抗原的表达量仅为野生型的13.3%,而重组质粒35T转染细胞为野生型的52.7%。转染后fut1mRNA水平随着时间延长而逐渐递减,在第1天重组质粒（682G＋35T）转染细胞fut1 mRNA水平仅为野生型（682A＋35C）的14%。结论：682A〉G突变明显降低α-1,2岩藻糖基转移酶活性,而35C〉T引起H抗原的表达部分下降。