H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 |
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作者姓名: | 贺贞 林东子 李观强 马卫列 丁航 张志珍 |
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作者单位: | 1. 广东医学院生物化学与分子生物学教研室, 广东东莞,523808 2. 东莞市慢性病防治院检验科, 广东东莞,523808 3. 深圳市龙岗区人民医院检验科, 深圳,518172 |
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基金项目: | 东莞市高等院校科研机构科技计划项目 |
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摘 要: | 目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价。结果 SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4 h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%,融合蛋白的纯度达到90%以上。Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明,皮下注射25、50、100μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P<0.01),其滴度达到1∶3 200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达。结论成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性。
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关 键 词: | 禽流感病毒 NS1 融合蛋白 多克隆抗体 |
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