高效液相色谱法同时测定微量全血中维生素A和E

目的]建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定微量全血样品中维生素A和E的方法。方法]取全血50μl,用无水乙醇沉淀蛋白,再加入正己烷漩涡提取维生素A和E,取一定量正己烷层经氮气流挥干,残渣加甲醇溶解后用高效液相色谱法分析,标准曲线法定量。对血样的提取条件和色谱柱选择、流动相比例、流速、柱温等实验条件进行了优化,确定了最佳分析条件。本法色谱分离条件为:分离柱为ZorbaxC8色谱柱(4.6mm×15cm,5μm);流动相为甲醇-水(98 2);流速为0.70ml/min;柱温为50℃;紫外检测波长:维生素A为325nm,维生素E为292nm。结果]维生素A和E标准曲线的相关系数均大于0.999;相对标准偏差(RSD)﹤5%。对于50μl全血,本法的检出限维生素A为0.02μg/ml;维生素E为0.08μg/ml。维生素A和E的加标回收率分别为93.2%～104%和80.4%～84.9%。结论]所建立的方法快速、简便、灵敏、准确,已成功地测定了微量全血中维生素A和E。

SINULTANEOUS DETERMINATON OF VITAMIN A AND E IN MICRO AMOUNT OF HUMAN WHOLE BLOOD BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY