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大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达
引用本文:潘伟,谷雪梅,沈飞霞. 大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达[J]. 温州医学院学报, 2012, 42(6): 521-525
作者姓名:潘伟  谷雪梅  沈飞霞
作者单位:温州医学院附属第一医院 内分泌科,浙江温州,325000
基金项目:浙江省自然科学基金资助项目
摘    要:目的:构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体,并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因,插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7。PCR、酶切鉴定后,重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒。经PCR进行鉴定,转染293细胞扩增并纯化,半数组织培养感染剂量(TCID 50)方法测定腺病毒滴度。体外转染分化成熟的3T3-L1细胞,用Western blot方法检测AQP7的表达水平。结果:PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确。同时成功构建AQP7重组腺病毒,并制备出高滴度的病毒保存液,可以有效转染3T3-L1细胞。结论:成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达,为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础。

关 键 词:水通道蛋白7  重组腺病毒  3T3-L1细胞  大鼠

Construction of rat AQP7 recombinant adenovirus vector and its expression in 3T3-L1 cells
PAN Wei , GU Xuemei , SHEN Feixia. Construction of rat AQP7 recombinant adenovirus vector and its expression in 3T3-L1 cells[J]. Journal of Wenzhou Medical College, 2012, 42(6): 521-525
Authors:PAN Wei    GU Xuemei    SHEN Feixia
Affiliation:.Department of Endocrinology,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou,325000
Abstract:
Keywords:
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