| hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位 |
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| 引用本文： | 沈涛,郭洲洋,李妍,巴根,陈之光,郭然,杨蕾,付勤.hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位[J].现代肿瘤医学,2017(17):2699-2702. |
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| 作者姓名： | 沈涛 郭洲洋 李妍 巴根 陈之光 郭然 杨蕾 付勤 |
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| 作者单位： | 1. 中国医科大学附属盛京医院骨科,辽宁 沈阳,110004;2. 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室,细胞生物学卫生部重点实验室,辽宁 沈阳 110001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31201053 |
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| 摘 要： | 目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位.方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至cDNA.进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的cDNA全长片段,并将其亚克隆于pEGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达.进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内pEGFP-hSesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源hSesn3蛋白.结果:hSesn3基因cDNA全长片段克隆于真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序.Western blot检测到了GFP-hSesn3融合蛋白表达,分子量约为79 kDa.在MG-63细胞中pEGFP-hSesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了hSesn3蛋白.结论:成功构建了hSesn3基因cDNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中pEGFP-hSesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了hSesn3蛋白.
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| 关 键 词： | hSesn3 Westernblot 绿色荧光蛋白 质粒构建 |
Construction of eukaryotic expression plasmid of human Sesn3 gene and expression and localization of fusion protein in osteosarcoma cells |
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| Shen Tao,Guo Zhouyang,Li Yan,Ba Gen,Chen Zhiguang,Guo Ran,Yang Lei,Fu Qin.Construction of eukaryotic expression plasmid of human Sesn3 gene and expression and localization of fusion protein in osteosarcoma cells[J].Journal of Modern Oncology,2017(17):2699-2702. |
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| Authors: | Shen Tao Guo Zhouyang Li Yan Ba Gen Chen Zhiguang Guo Ran Yang Lei Fu Qin |
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| Keywords: | hSesn3 Western blot GFP plasmid construction |
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