微载体技术培养人骨髓间充质干细胞的成骨诱导实验

目的：以微载体技术成骨诱导培养人骨髓间充质干细胞，建立一种大量、快速获得骨组织工程种子细胞的方法。方法：实验于2002—12／2003—08在第三军医大学西南医院中心实验室完成。将普通培养瓶培养的第3代人骨髓间充质干细胞采用搅拌式生物反应器和微载体成骨诱导培养，观察细胞增殖情况，作出生长曲线。分别于培养的第2，4，6，8，10，12，14d检测诱导细胞的碱性磷酸酶活性，并与普通成骨诱导方法进行对比。最后进行细胞碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原、骨钙素的免疫组织化学染色，观察培养细胞的成骨细胞表型的表达。结果：微载体法接种24h后约87％的人骨髓间充质干细胞贴附于微载体并铺展，3d后生长加速，约10～11d后细胞生长达最大值，最终细胞收获密度为接种时的约15～20倍。诱导细胞的碱性磷酸酶活性在培养的第12天达最大值，并表达碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素等成骨细胞表型。微载体成骨诱导细胞的碱性磷酸酶活性与普通成骨诱导方法差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：应用微载体可以成功进行人骨髓间充质干细胞的成骨诱导扩增，可以满足骨组织工程量和质的需要。