带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定

目的 表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）ε毒素（ETX），鉴定ETX的毒素特性。方法 在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白，镍柱纯化蛋白；用MTS法测定带不同标签ETX的毒性；用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况。结果 成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白，纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白。通过细胞毒实验，证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱，mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致，确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值。将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞，观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合，证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感。将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞，mScarlet-ETX只与人红细胞结合。结论 mScarl...