金铁锁β-香树素合酶cDNA的克隆、原核表达和功能鉴定

目的 克隆金铁锁Psammosilene tunicoides三萜皂苷生物合成途径中的关建酶基因——β-香树素合酶全长cDNA，并对其进行表达和分析，为研究其在三萜皂苷合成途径的关键作用及次生代谢产物工程技术在金铁锁上的应用奠定基础。方法 应用RT-PCR和RACE等方法，克隆金铁锁β-香树素合成酶基因全长，将目的片段转化大肠杆菌表达菌株BL21中，IPTG诱导表达，以2，3-氧化鲨烯为底物进行体外酶促，采用HPLC法鉴定产物。结果 克隆得到金铁锁β-香树素合成酶基因，全长2 882 bp，ORF长2 284 bp，编码760个氨基酸。表达产物具有催化2，3-氧化鲨烯生成β-香树素合酶的活性。结论 克隆所得的全长cDNA通过大肠杆菌表达β-香树素合酶，并能催化2，3-氧化鲨烯生成β-香树素，为金铁锁次生代谢工程研究提供了重要的基础。