SARS冠状病毒M基因膜内区的克隆、表达与鉴定 |
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作者姓名: | 刘志伟 胡族琼 赵卫 张文炳 龙北国 |
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作者单位: | 南方医科大学附属南方医院检验科,广州,510515;南方医科大学热带医学与公共卫生学院流行病学系,广州,510515;南方医科大学热带医学与公共卫生学院微生物学系,广州,510515 |
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基金项目: | 广东省医药卫生科研项目 |
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摘 要: | 目的对SAILS冠状病毒M蛋白膜内部分(Mc蛋白)的基因(Mc区)进行克隆、表达及鉴定。方法采用PCR技术从SAILS-CoV GD322株M基因全长片段上扩增得到Mc区,克隆至pGEM-T载体。利用引物上的EcoR I/Xho I酶切位点切下Mc区插入至pET-32a(+)表达载体,转化原核表达系统BL21,表达His-融合蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定。结果扩增的Mc区长度为360bp,重组子经PCR,双酶切和测序鉴定,获得pET-32a(+)/Mc原核表达菌株并可进行高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot验证为相对分子质量约43000的融合蛋白,与预期理论值相符。结论实现了Mc蛋白的高效表达,为进一步研究SAILS冠状病毒Mc蛋白的生物学作用奠定了基础。
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关 键 词: | SARS冠状病毒 Mc蛋白 Mc区 表达 鉴定 |
文章编号: | 1672-3619(2007)03-0215-03 |
收稿时间: | 2006-11-19 |
修稿时间: | 2006-12-23 |
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