| 配体活化多环芳烃受体与二恶英反应元件结合能力的测定 |
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| 引用本文： | 孙晞,徐顺清. 配体活化多环芳烃受体与二恶英反应元件结合能力的测定[J]. 现代预防医学, 2005, 32(3): 189-191 |
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| 作者姓名： | 孙晞 徐顺清 |
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| 作者单位： | 1. 广东暨南大学食品系,广州,510630
2. 华中科技大学同济医学院环境医学研究所,武汉,湖北,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (2 0 10 70 0 2 ,2 0 3 770 17) |
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| 摘 要： | 目的 :2 ,3,7,8-四氯化二苯并二恶英 (TCDD)激活细胞溶质中多环芳烃受体后形成的复合物可与含二恶英反应元件的DNA探针结合 ,本研究利用新建立的外切酶保护PCR方法测定此结合亲和力 ,为评估配体的生物或毒效应提供依据。方法 :将 2 0nmol/LTCDD溶液与 10 0 μlSD大鼠肝细胞溶质温育 ,再与 0～ 15nmol/L含二恶英反应元件的寡核苷酸探针作用形成复合物 ,用核酸外切酶Ⅲ和S1核酸酶进行消化后 ,利用SYBRGREEN荧光适明定量PCR测定其诱导产生的结合DNA含量 ,绘制饱和曲线。经过数学变换估算配体—AhR复合物与DNA结合反应的宏观解离常数 (Kd和最大受体结合量 (Bmax)。结果 :绘制出TCDD活化AhR结合DNA的饱和曲线 ,计算得 :宏观解离常数Kd值为 1. 7± 0 . 2 (nmol/L) 2 ,DNA探针的最大受体结合量为 (14 6 7± 12 3)fmol/mg蛋白。结论 :外切酶保护PCR分析可测定配体诱导产生的AhR -DNA结合活性 ,为二恶英作用强度提供信息。
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| 关 键 词： | 配体 受体结合 DNA探针 反应元件 诱导 解离常数 DNA结合活性 二恶英 多环芳烃 TCDD |
| 文章编号： | 1003-8507(2005)03-0189-03 |
| 修稿时间： | 2004-11-16 |
THE MENSURATION OF BINDING ACTIVITY BETWEEN TRANSFORMED ARL HYDROCARBON RECEPTOR AND DIOXIN RESPONSE ELEMENTS |
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| SUN Xi,XU Shun-qing. THE MENSURATION OF BINDING ACTIVITY BETWEEN TRANSFORMED ARL HYDROCARBON RECEPTOR AND DIOXIN RESPONSE ELEMENTS[J]. Modern Preventive Medicine, 2005, 32(3): 189-191 |
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| Authors: | SUN Xi XU Shun-qing |
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| Affiliation: | SUN Xi,XU Shun-qing.Department of Food Science,Jinan University,Guangzhou,510630. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Equilibrium dissociation constant Arl hydrocarbon recep tor Dioxin response elments |
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