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| 人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定 | |
| 引用本文： | 殷小涛,王伟,田仁礼,徐元基,阎瑾琦,张巍,高江平,于继云. 人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2013, 29(8): 877-881 |
| 作者姓名： | 殷小涛 王伟 田仁礼 徐元基 阎瑾琦 张巍 高江平 于继云 |
| 作者单位： | 1. 解放军总医院泌尿外科,北京100853;军事医学科学院基础医学研究所,北京100850 2. 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850 3. 解放军总医院泌尿外科,北京,100853 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家高技术研究发展计划(863)项目 |
| 摘 要： | 目的 构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法 设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28 a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性.结果 重组表达载体经BamH Ⅰ和HindⅢ鉴定正确；IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)24000大小的重组蛋白；纯化后的蛋白纯度达到90％.Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性.结论 成功构建了原核表达载体pET28 a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性. |
| 关 键 词： | Survivin 原核表达 蛋白纯化 活性检测 |
Prokaryotic expression, purification and antigenicity identification of recombinant human survivin protein |
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| Abstract: | |
| Keywords: | survivin prokaryotic expression protein purification antigenicity identification |
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