| 封闭N-cadherin解整合素金属蛋白酶水解位点的单链抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 李小鸥,黄巍,李莉,周丽荣.封闭N-cadherin解整合素金属蛋白酶水解位点的单链抗体的制备及鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2013,29(9):949-952. |
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| 作者姓名： | 李小鸥 黄巍 李莉 周丽荣 |
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| 作者单位： | 1. 武汉大学人民医院儿科
2. 武汉市医学科学研究所,湖北武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，武汉大学自主青年基金 |
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| 摘 要： | 目的 制备封闭神经型钙黏素(N-cadherin)解整合素金属蛋白酶水解位点(ADAM)的单链抗体(scFv),并进行鉴定.方法 首先利用RT-PCR技术从分泌抗N-cadherin的ADAM水解位点单克隆抗体(mAb)细胞株中扩增出重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段,然后通过重叠延伸PCR法(SOE-PCR),构建成scFv基因片段.再将其克隆入原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达,通过镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot法等测定重组蛋白的生物学活性.结果 PCR、酶切和测序表明scFv片段长744 bp,编码248个氨基酸.scFv基因表达载体转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达出相对分子质量(Mr)约29 000的目的蛋白,主要为包涵体形式,经变性,纯化和复性后,获得纯度达90％以上的scFv蛋白,ELISA和Western blot法检测表明可溶性scFv可以与N-cadherin的ADAM水解位点序列多抗原短肽和全长N-cadherin结合.结论 成功构建并表达封闭N-cadherin的ADAM加工位点单链抗体.
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| 关 键 词： | ADAM10 N-cadherin 单链抗体 基因表达 |
Preparation and identification of a single chain antibody against the shedding site of N-cadherin cleaved by ADAM10 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ADAM10 N-cadherin single chain antibody gene expression |
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