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实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用
引用本文:单雪芹,韩先干,张敏,宋军,刘海文,田明星,潘玲,丁铲,周锦萍. 实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2013, 29(4): 430-433
作者姓名:单雪芹  韩先干  张敏  宋军  刘海文  田明星  潘玲  丁铲  周锦萍
作者单位:1. 安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
2. 中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200241
3. 安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥,230036
4. 上海市动物疫病预防控制中心,上海,201103
基金项目:国家重点基础研究发展计划(973)资助,中央级科研院所公益性研究专项
摘    要:目的 建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法.方法 依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法.结果 用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平.最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性.结论 成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法.

关 键 词:Th1/Th2型细胞因子  巨噬细胞RAW264.7  实时荧光定量PCR  布鲁氏菌

Establishment and preliminary application of a quantitative real-time PCR method for detecting the transcriptions of Th1/Th2 cytokines in RAW264.7 cells
Abstract:
Keywords:
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