| 人PDLIM4基因启动子报告基因载体的构建及其在人类肿瘤细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 蒋慧慧,胡志敏,李先哲,席广民,蒋汉明,苑辉卿.人PDLIM4基因启动子报告基因载体的构建及其在人类肿瘤细胞中的表达[J].山东大学学报(医学版),2011,49(5):19-23,28. |
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| 作者姓名： | 蒋慧慧 胡志敏 李先哲 席广民 蒋汉明 苑辉卿 |
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| 作者单位： | 1. 山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所,济南,250012
2. 山东大学齐鲁医院检验科,济南,250012 |
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| 基金项目： | 山东省卫生系统中青年重点科技人才资助计划 |
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| 摘 要： | 目的构建人PDLIM4基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-promoter,检测其在不同肿瘤细胞中的表达。方法据Genebank中人PDLIM4基因启动子序列分别设计上下游引物,扩增其启动子片段,并插入到pGL3-Basic报告基因载体,分别得到含有3kb和1.2kb的PDLIM4基因启动子的两个报告基因质粒pGL3-PD-LIM4-3kb和pGL3-PDLIM4-1.2kb。序列为1.2kb的启动子利用Erase-a-base试剂盒,经外切酶Ⅲ从5’端逐步酶切得到5个含不同长度启动子序列的报告基因载体:pGL3-PDLIM4-1.2D1、pGL3-PDLIM4-1.2D2、pGL3-PDLIM4-1.2D3、pGL3-PDLIM4-1.2D4、pGL3-PDLIM4-1.2D5。将构建的报告基因载体分别瞬时转染以下细胞株:Hela、MDA-MB231、KB、PC-3、LNCaP,检测其荧光素酶表达活性。结果所构建质粒经酶切、测序鉴定,其片段长度及序列均正确。转染结果显示,长片段的3kb和1.2kb启动子序列在所测试的细胞株中均有表达,但在人激素非依赖前列腺癌PC-3细胞株、人激素依赖前列腺癌LINCaP细胞株中表达较低。而不同长度的启动子报告基因质粒转染PC-3、LNCaP的结果显示,pGL3-PDLIM4-1.2kb表达活性最强,pGL3-PDLIM4-970bp表达活性最弱。结论成功构建了7个分别含有不同长度的PDLIM4启动子报告基因载体,其在不同的肿瘤细胞株中均有不同程度的表达,而在前列腺癌细胞中表达较低。
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| 关 键 词： | 基因 PDLIM4 启动子 报告载体 荧光素酶 |
Construction of human PDLIM4 promoter luciferase report gene vectors and their expressions in cancer cells |
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| JIANG Hui-hui,HU Zhi-min,LI Xian-zhe,XI Guang-min,JIANG Han-ming,YUAN Hui-qing.Construction of human PDLIM4 promoter luciferase report gene vectors and their expressions in cancer cells[J].Journal of Shandong University:Health Sciences,2011,49(5):19-23,28. |
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| Authors: | JIANG Hui-hui HU Zhi-min LI Xian-zhe XI Guang-min JIANG Han-ming YUAN Hui-qing |
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| Institution: | JIANG Hui-hui1,HU Zhi-min2,LI Xian-zhe1,XI Guang-min1,JIANG Han-ming1,YUAN Hui-qing1(1.Institute of Biochemistry and Molecular Biology,School of Medicine,Shandong University,Jinan 250012,China,2.Clinical Laboratory,Qilu Hospital of Shandong University,China) |
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| Abstract: | Objective To construct PDLIM4 promoter luciferase report gene vectors containing different promoter sequences,detect expressions of them in different cancer cell lines,and investigate regulatory mechanisms by which the human PDLIM4 gene is silenced in prostate cancer.Methods The PDLIM4 gene promoter was amplified from human genomic DNAs using standard PCR.Products of PCR were inserted into a luciferase report gene pGL3-Basic vector,and generated two recombinant plasmids which contained a 3 kb sequence(pGL3-... |
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| Keywords: | Gene PDLIM4 Promoter Report gene vector Luciferase |
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