清热解毒方体外抗人乳头瘤病毒感染及作用机制

目的:采用高危型人乳头瘤状病毒16(human papillomavirus 16,HPV16)体外假病毒感染模型评价清热解毒方体外抗HPV16感染活性及作用方式,并探讨清热解毒方的作用机制。方法:首先,将HPV16假病毒加入到293T/17细胞中,建立HPV假病毒体外荧光感染模型,以此模型评价清热解毒方(20~1 000 g·L~(-1))体外抗HPV16作用,探讨清热解毒方抗HPV感染的量效关系;其次,采用HPV假病毒模型,通过预处理细胞、与病毒同时作用于细胞、病毒处理后作用于细胞的不同处理方法,探讨清热解毒方(20 g·L~(-1))抗HPV的作用方式;最后,从清热解毒方作用后HPV转化的He La细胞中提取致癌蛋白E7,细胞外信号调节激酶(ERK)以及核转录因子-κB(NF-κB),用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测E7,ERK,NF-κB蛋白表达,探讨清热解毒方(3. 33~20 g·L~(-1))在肿瘤相关蛋白水平上的作用机制。结果:与病毒组比较,清热解毒方可以明显抑制HPV16假病毒的感染(P 0. 05),且呈现明显的浓度依赖关系;且清热解毒方能够通过保护细胞、抑制病毒吸附并抑制病毒感染后过程的多种方式发挥其抗HPV16作用,其中保护细胞的效果更显著(P 0. 01),说明清热解毒方能够显著预防HPV16感染;与空白组比较,清热解毒方能够明显抑制E7致癌蛋白的表达,并抑制ERK,NF-κB蛋白的表达(P 0. 05,P 0. 01),达到抗肿瘤的作用。结论:清热解毒方具有较好的抑制HPV病毒的效果,该研究为清热解毒方清除HPV病毒和防治宫颈癌提供了创新性的理论依据。