人快速型肌球蛋白结合蛋白C原核表达载体的构建及表达

目的构建人快速型肌球蛋白结合蛋白C(MyBP-C2)融合蛋白表达载体,高效表达和纯化pET28aMyBP-C2融合蛋白,为进一步研究炎性肌病动物模型的建立奠定基础。方法以人MyBP-C2的cDNA(human MyBP-C2cDNA)为模板,以PCR方法扩增获得目的基因。目的基因经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至pET28a(+)表达载体中构建pET28a-MyBP-C2表达载体,并通过与Genebank中公布的MYBP-C2序列进行比对,对插入片段进行DNA测序鉴定。使用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白pET28a-MyBP-C2。结果成功构建了pET28a-MyBP-C2表达载体,插入片段的DNA测序结果与Genebank中公布的MYBPC2序列一致。成功纯化获得了人MyBP-C2蛋白片段。结论本研究成功构建了MyBP-C2的表达载体,并成功制备了MyBP-C2蛋白片段,有助于研究建立新型实验性炎肌病的动物模型。