| 冬凌草IrCYP71基因的克隆和功能 |
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| 引用本文： | 陈延清,胡志刚,黄必胜,刘迪. 冬凌草IrCYP71基因的克隆和功能[J]. 中国实验方剂学杂志, 2018, 24(14): 29-35 |
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| 作者姓名： | 陈延清 胡志刚 黄必胜 刘迪 |
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| 作者单位： | 湖北中医药大学药学院 |
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| 基金项目： | 湖北省教育厅科学技术研究项目（B2016077） |
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| 摘 要： | 目的:克隆冬凌草二萜类化合物生物合成途径下游关键酶基因Ir CYP71,进行序列特征分析,对此基因编码的蛋白进行原核表达分析以及亚细胞定位,并对蛋白在宿主细胞表达的条件进行了优化。方法:根据转录组测序所得的Ir CYP71基因片段,克隆出全长c DNA序列;构建p ET28a(+)-Ir CYP71重组质粒,转化到Rosetta感受态细胞,小量表达和大量表达蛋白并鉴定,进行包涵体蛋白的纯化与复性,再对复性蛋白纯化鉴定分析。基于gateway克隆技术构建出PCR8/GW/TOPO-Ir CYP71载体之后与改造Pearleygate104载体重组,之后与农杆菌GV3101重组,转入烟草中瞬时表达,从而进行蛋白亚细胞定位。结果:克隆得到的Ir CYP71基因全长c DNA为1 593 bp,编码530个氨基酸,并在Gen Bank注册(登录号MG800628)。经大肠埃希菌表达系统表达的重组蛋白相对分子质量正确,在62 k Da左右,纯化后的重组蛋白总量有1 mg,蛋白纯度为85%。此蛋白亚细胞定位在细胞核。结论:对冬凌草Ir CYP71基因进行了初步验证,并对基因表达的蛋白进行原核表达和亚细胞定位,使该基因在冬凌草二萜成分的生物合成过程中的作用得到了进一步的阐述。
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| 关 键 词： | 冬凌草 叶 生物合成途径 亚细胞定位 原核表达 功能基因研究 |
| 收稿时间： | 2018-03-08 |
Gene Cloning and Functional Characterization of IrCYP71 Gene in Isodon rubescens Leaves |
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| CHEN Yan-qing,HU Zhi-gang,HUANG Bi-sheng and LIU Di. Gene Cloning and Functional Characterization of IrCYP71 Gene in Isodon rubescens Leaves[J]. China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2018, 24(14): 29-35 |
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| Authors: | CHEN Yan-qing HU Zhi-gang HUANG Bi-sheng LIU Di |
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| Affiliation: | College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065, China,College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065, China,College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065, China and College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Isodon rubescens leaves biosynthetic pathway subcellular localization prokaryotic expression functional gene characterization |
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