ADAM17-shRNA通过Akt/GSK3β信号通路促进HT29结肠癌细胞的凋亡

目的探讨沉默解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因的表达对HT29结肠癌细胞增殖和凋亡的抑制作用及其可能机制。方法将HT29结肠癌细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组,干扰组细胞转染重组慢病毒载体以沉默ADAM17基因的表达,阴性对照组细胞转染阴性对照重组慢病毒载体,空白对照组细胞加入等量的PBS溶液。采用实时荧光定量PCR法(real-time PCR)检测ADAM17 mRNA的表达,采用Western blot法检测ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase3)、磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(P-GSK3β)及糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白的表达,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力的变化,采用Annexin-V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与阴性对照组和空白对照组比较,干扰组细胞中ADAM17 mRNA及其蛋白的表达水平均较低,同时点(培养24、48及72 h)的吸光度值(A值)也较低,细胞凋亡率较高,caspase3蛋白的表达水平较高,P-Akt和P-GSK3β蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 ADAM17基因沉默可能通过抑制Akt/GSK3β通路的激活,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。