人Leptin的高效表达、纯化及生物学活性研究

将人Leptin表达质粒pBV200-OB转化宿主菌E.coli JM109，热诱导获得目的蛋白的表达。经SDS－PAGE鉴定分析，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40％以上，且以包涵体的形式表达。通过包函体分离，Sephacryl S200HR凝胶和DEAE52离子交换层极及Hypersil C18柱反相色谱纯化，获得纯度在95％以上，内毒素含量小于10EU／Mg的高纯度的重组人Leptin.Westem-blot鉴定表明，纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异结合；蛋白质N端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理，其分子中Cys96和Cys146形成二硫键。体内活性检测显示，纯化和复性的rh-Leptin明显抑制BALB／c小鼠的进食和体重增长，提示其具有明显的生物学活性。