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| 大鼠β-防御素2真核表达载体构建及转染大鼠角膜上皮细胞的研究 | |
| 引用本文： | 但婧,宋秀胜,杨燕宁,李霞. 大鼠β-防御素2真核表达载体构建及转染大鼠角膜上皮细胞的研究[J]. 国际眼科杂志, 2017, 17(3): 422-426 |
| 作者姓名： | 但婧 宋秀胜 杨燕宁 李霞 |
| 作者单位： | 中国湖北省武汉市,武汉大学人民医院眼科中心; 中国湖北省恩施市,恩施自治州中心医院眼科中心;中国湖北省恩施市,恩施自治州中心医院眼科中心;中国湖北省武汉市,武汉大学人民医院眼科中心;中国湖北省恩施市,恩施自治州中心医院眼科中心 |
| 基金项目： | 湖北省卫生和计划生育科研项目(No.WJ2015MB194) |
| 摘 要： | 目的：应用基因工程技术构建含大鼠β-防御素2(rat beta defensin 2，rBD-2)目的基因的真核重组质粒，通过脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞，检测目的基因在转染细胞中的表达，探讨应用该载体获得重组rBD-2在眼表细胞中表达的可行性，并为进一步研究rBD-2的体内外抗微生物活性提供实验基础，以期为感染性角膜病防治提供新方法。 方法：将采用PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成rBD-2 DNA片段连接到真核表达载体pIRES2-ZsGreen1的XhoⅠ与BamHⅠ酶切位点之间，构建pIRES2-ZsGreen1-rBD-2真核重组表达载体，重组质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，卡那霉素筛选出阳性克隆子，经酶切、测序鉴定重组载体构建成功后，采用脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞，此处实验分为三组即重组载体pIRES2-ZsGreen1-rBD-2转染的大鼠角膜上皮细胞组、未转染的空细胞组以及空载体pIRES2-ZsGreen1所转染的大鼠角膜上皮细胞组，在倒置荧光显微镜下观察细胞转染情况，最后经实时荧光定量RT-PCR相对定量法检测各组转染细胞中rBD-2基因mRNA的表达差异。 结果：成功构建pIRES2-ZsGreen1-rBD-2真核重组质粒，应用实时荧光定量RT-PCR相对定量法检测到重组质粒pIRES2-ZsGreen1-rBD-2转染组的大鼠角膜上皮细胞中rBD-2基因的mRNA表达水平明显多于另两组。 结论：应用基因工程技术构建的rBD-2真核表达载体pIRES2-ZsGreen1-rBD-2，通过脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞，能够使外源rBD-2基因在大鼠角膜上皮细胞中被转录成mRNA。 |
| 关 键 词： | 大鼠β-防御素2 真核表达载体 重组质粒 大鼠角膜上皮细胞 |
| 收稿时间： | 2016-10-24 |
| 修稿时间： | 2017-02-20 |
Construction of rat beta defensin-2 eukaryotic expression vector and expression in the transfected rat corneal epithelial cell |
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| Jing Dan,Xiu-Sheng Song,Yan-Ning Yang and Xia Li. Construction of rat beta defensin-2 eukaryotic expression vector and expression in the transfected rat corneal epithelial cell[J]. International Eye Science, 2017, 17(3): 422-426 | |
| Authors: | Jing Dan Xiu-Sheng Song Yan-Ning Yang Xia Li |
| Affiliation: | Department of Ophthalmology, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, Hubei Province, China; Department of Ophthalmology, the Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture, Enshi 445000, Hubei Province, China;Department of Ophthalmology, the Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture, Enshi 445000, Hubei Province, China;Department of Ophthalmology, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, Hubei Province, China;Department of Ophthalmology, the Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture, Enshi 445000, Hubei Province, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | rat beta defensin-2 eukaryotic expression vector recombinant plasmid rat corneal epithelial cell |
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