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| ERCC1的表达纯化及其单克隆抗体的制备 | |
| 作者姓名： | 李晓杰 蒋华 高慧萍 姚晓 石必枝 李宗海 |
| 作者单位： | 1. 郴州市第一人民医院病理科,湖南,郴州,423000 2. 上海市肿瘤研究所,癌基因及相关基因国家重点实验室,上海,200032 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
| 摘 要： | 目的:表达纯化ERCC1蛋白并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆并原核表达ERCC1蛋白, 其氨基端带有6-His标签.纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb.结果:成功表达了ERCC1蛋白.SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为37 000.获得了1 株稳定分泌抗ERCC1抗体的杂交瘤细胞株(6F8), 其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG2b.ELISA检测, 对应腹水mAb的效价为1∶ 1.5×106.Western blot结果显示抗ERCC1 mAb具有良好的特异性.结论:成功地表达纯化ERCC1蛋白并制备了1株抗ERCC1 mAb. |
| 关 键 词： | 原核表达 纯化 单克隆抗体 |
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