短发卡RNA表达质粒的构建及对ΔNp63基因的抑制作用

目的构建ΔNp63特异性短发卡RNA（shRNA）表达质粒，检测ΔNp63-shRNA对膀胱移行细胞癌（TCCB）细胞株5637中ΔNp63信使RNA（mRNA）表达的抑制作用。方法设计合成ΔNp63 shRNA短链寡核苷酸，克隆到Pgenesil-1质粒载体中，构建ΔNp63特异shRNA表达质粒，在转染试剂介导下转染5637细胞，6孔板每孔加入0．4μg质粒。半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测ΔNp63 mRNA表达水平。结果经PstI＋Sail双酶切及测序鉴定ANp63，shR．NA表达质粒构建成功。在受转染的5637细胞内ΔNp63-shRNA干预组ΔNp63 mRNA水平明显低于control组与PBs组（P〈0．05），与control组和PBS组比较抑制率分别为57．3％和63．0％。结论ΔNp63特异性shRNA在5637细胞中对ΔNp63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。