健脾解毒方对胃癌细胞凋亡及基因调控机制的研究

目的:研究健脾解毒方对胃癌细胞凋亡及基因调控机制。方法:96孔板接种对数生长期SGC-7901细胞,接种浓度是5×104个/mL,以10、20、40μg/mL健脾解毒方分别作用于胃癌SGC-7901细胞24 h。倒置显微镜下察细胞形态;MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色检测线粒体膜电位;运用Real-time PCR检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C (Cytochrome c)、自杀相关因子(Fas)、半胱氨酸蛋白酶-8 (Caspase-8)基因表达;Westernblot检测Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8蛋白表达。结果:与对照组比较,20、40μg/mL健脾解毒方组细胞抑制率较高,差异均有统计学意义(P 0.05),并且呈剂量依赖性。与对照组比较,10μg/mL的健脾解毒方处理24 h后,SGC-7901细胞形态学未有明显改变;20μg/mL的健脾解毒方处理24 h后,SGC-7901细胞形态学发生改变,细胞变圆;40μg/mL处理后的细胞皱缩,数目明显的减少。10、20、40μg/mL健脾解毒方处理SGC-7901细胞后,分别有5.98%、14.94%和31.88%细胞出现凋亡。与对照组比较,10、20、40μg/mL健脾解毒方组细胞凋亡率显著升高(P 0.05),并呈浓度依赖性。随着健脾解毒方浓度的增加,SGC-7901细胞的线粒体膜电位呈浓度依赖性下降(P 0.05)。与对照组比较,10、20、40μg/mL健脾解毒方组处理SGC-7901细胞24 h后,SGC-7901细胞中的Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8的基因表达明显升高(P 0.05,P 0.01),并呈剂量依赖性。20、40μg/mL健脾解毒方处理SGC-7901细胞24 h后,随着药物浓度的增加,Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8蛋白表达含量也增加(P 0.05,P 0.01),且呈浓度依赖性。结论:健脾解毒方能够剂量依赖性的诱导细胞发生凋亡可能与影响细胞线粒体膜电位和Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8蛋白的表达相关。