淫羊藿苷对白介素-1β诱导软骨细胞退变的保护作用

目的观察不同浓度淫羊藿苷（icariin, ICA）对IL-1β诱导软骨细胞退变的保护作用。方法原代分离培养新生24h大鼠四肢长骨干骺端透明软骨的软骨细胞，取P1代细胞，以4×103/孔接种96孔培养板，加入终浓度分别为1×10-7、1×10-6和1×10-5mol/L的ICA，MTT法分别测定12、24、36、48、60、72h后软骨细胞增殖情况。以1.2×105/孔接种6孔培养板，分别设置空白对照组（N组）、炎症刺激组（M组，加入10ng/mL IL-1β诱导软骨细胞退变）和淫羊藿苷低、高剂量组（ICA-L组和ICA-H组，炎症刺激组基础上加入ICA，终浓度分别为1×10-7、1×10-6mol/L），连续干预72h。ELISA法测定培养上清液中Ⅱ型胶原（collagen-Ⅱ, Col-Ⅱ）和糖胺多糖（glycosaminoglycan, GAG）含量，RT-PCR法检测细胞Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶13（matrix metaloproteinase13, MMP13）、蛋白聚糖（aggrecan, Acan）和Sox9 mRNA表达情况。结果1×10-5mol/L ICA早期（24h）表现为抑制软骨细胞增殖（P<0.01），72h后促进软骨细胞增殖（P<0.01）；1×10-7mol/L和1×10-6mol/L ICA干预36~72h后促进软骨细胞增殖（P<0.05），但其中1×10-7mol/L在60h与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。ICA干预72h后，与M组比较，ICA-L和ICA-H组，GAG浓度均显著升高（P<0.05），而Col-Ⅱ含量于ICA-L组降低、ICA-H组升高，但差异均无统计学意义（P>0.05）。ICA-L组Acan/Sox9 mRNA表达升高（P<0.01），ICA-H组Col-ⅡmRNA水平升高而MMP13 mRNA表达降低（P<0.01）。结论淫羊藿苷能影响软骨细胞基质微环境，促进软骨细胞表型基因表达，抑制MMP13 mRNA表达，进而拮抗IL-1β诱导的软骨细胞退变。