莫西沙星耐药的艰难梭菌多重聚合酶链反应检测和基因分型

目的：建立一种多重 PCR 方法用于莫西沙星耐药的艰难梭菌鉴定和初步基因分型。方法根据艰难梭菌 slpA 可变区间核苷酸序列的差异设计5种 slpA 基因型（gr、hr、fr、gc08和078）的特异性 PCR 引物，同时加入检测艰难梭菌管家基因磷酸甘油醛异构酶基因 tpi 的种特异性引物，构建多重PCR 方法；利用9种肠道常见的正常或致病菌验证多重 PCR 方法的特异性，利用46株分属于11个slpA 基因型的艰难梭菌参考菌株来验证方法的检测和分型能力；利用建立的多重 PCR 方法检测39株莫西沙星耐药的临床菌株，以 slpA 测序分型法为参照方法，评估该方法的临床实用性。结果多重PCR 检测9种肠道常见的正常或致病菌 tpi 和5种 slpA 基因型均为阴性；46株艰难梭菌参考菌株 tpi均为阳性，36株分属于5种靶 slpA 基因型（gr、hr、fr、gc08和078）的菌株被正确分型，10株分属于其他6种基因型的参考菌株均无法分型。39株莫西沙星耐药的艰难梭菌临床菌株 tpi 均为阳性，32株检出具体基因型，其中22株为 slpA 基因型 gc08，6株为 hr，2株为 fr，2株为078，与 slpA 测序分型结果一致；7株多重 PCR 无法分型，slpA 测序分型结果显示其基因型均不包含在多重 PCR 分型范围内。结论成功建立一种简单、快捷、临床实验室适用的艰难梭菌检测，且能够分辨出5种 slpA 基因型的多重PCR 方法；莫西沙星耐药的艰难梭菌主要为 slpA 基因型 gc08。

Detection and genotyping of moxifloxacin-resistant Clostridium difficile by multiplex polymerase chain reaction