人4—1BB—hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建 |
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引用本文: | 万兵,张利宁,等.人4—1BB—hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建[J].山东医科大学学报,2002,40(1):17-18,22. |
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作者姓名: | 万兵 张利宁 |
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作者单位: | 山东大学医学院免疫学研究所 |
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摘 要: | 目的:构建人4-1BB胞膜外区-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体。方法:PCR扩增人4-1BB胞膜外区和hIgG1Fc基因片段,用HindⅢ、PstI酶切4-1BB胞膜外区,PstI、EcoR I酶切hIgG1Fc,HindⅢ、EcoRI酶切pCDNA3,纯化后的酶切产物经T4DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性克隆,PCR及测序鉴定。结果:连接反应产物转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选出多个阳性克隆;分别以针对4-1BB胞膜外区和hIg1Fc的引物进行PCR扩增,电泳后观察到一558bp、708bp的特异性条带,与4-1BB胞膜外区和hIgG1Fc相符,提示构建成功。进一步测序分析证明克隆在pCDNA3质粒中的4-1BB和hIgG1Fc序列和读码框架正确,无基因突变。结论:成功构建人4-1BB胞膜外区-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体,为表达4-1BB融合蛋白奠定基础。
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关 键 词: | T淋巴细胞受体 基因表达 载体蛋白质类 人4-1BB |
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