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| 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化 | |
| 引用本文： | 温见翔,吴少庭,陈群,秦莉,袁仕善,林绮萍,雷明军,潘晖榕,张仁利,高世同,黄达娜. 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化[J]. 中国热带医学, 2004, 4(6): 897-899,925 |
| 作者姓名： | 温见翔 吴少庭 陈群 秦莉 袁仕善 林绮萍 雷明军 潘晖榕 张仁利 高世同 黄达娜 |
| 作者单位： | 1. 广东医学院,广东,湛江,524023 2. 深圳市疾病预防控制中心,广东,深圳,518020 3. 华中科技大学同济医学院,湖北,武汉,430030 4. 华南农业大学兽医学院,广东,广州,510642 |
| 摘 要： | 目的 构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。 方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a( ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。 结果 从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。 结论 利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | ESAT-6 ET 结核分枝杆菌 原核表达系统 结核病 蛋白 纯化 重组表达质粒 阳性克隆 IPTG |
| 文章编号： | 1009-9727(2004)06-897-03 |
Expression and purification of ESAT- 6 protein of Mycobacterium tuberculosis in pET prokaryotic expression system |
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| WEN Jian-xiang,WU Shao-ting,CHEN Qun,et al.. Expression and purification of ESAT- 6 protein of Mycobacterium tuberculosis in pET prokaryotic expression system[J]. China Tropical Medicine, 2004, 4(6): 897-899,925 | |
| Authors: | WEN Jian-xiang WU Shao-ting CHEN Qun et al. |
| Abstract: | |
| Keywords: | Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 Pexpression Purification |
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