局部miR-126基因治疗促进小鼠缺血后肢血管新生的观察

目的:通过体外构建重组腺病毒mi R-126,应用于小鼠缺血后肢腓肠肌局部治疗,观察mi R-126对缺血局部具有促血管新生作用。方法:重组腺病毒mi R-126包装、纯化、滴度的鉴定;C57小鼠随机分为A组(C57左侧缺血后肢手术组)、B组(空病毒C57左侧缺血后肢手术组)、C组(重组腺病毒mi R-126 C57左侧缺血后肢手术组)三组,制作小鼠缺血后肢模型,术后即刻将重组腺病毒mi R-126和腺病毒各50μl局部注射于小鼠缺血左后肢腓肠肌。分别于3、7、14天各组(3只)取左后肢腓肠肌做HE染色、CD31免疫组化染色、west ern bl ot检测Akt、ERK1/2、pAkt、pERK1/2蛋白水平以及实时定量PCR检测等。结果:各种检测结果显示C组较A、B两组血管内皮细胞增生明显,新生血管数目计数明显增多,mi R-126表达水平明显增高,尤其在第7天升高最为明显,以及VEGF、bFGF等介导的I P3和MAPK信号通路中ERK1、pERK1、AKT和pAKT蛋白水平表达明显增高。结论:mi R-126局部应用于缺血后肢,通过激活Akt、ERK1/2的相关通路,促进血管新生,利于缺血后肢功能恢复。

The observation of Local miR-126 gene therapy to promote neovascularization in mouse ischemic hindlimb