SHH体外诱导人牙髓干细胞向成骨细胞分化的研究

目的研究体外使用音猬因子(sonic hedgehog,SHH)体外诱导人牙髓干细胞(dental pulp stemcells,DPSCs)分化为成骨细胞的可行性,以优化DPSCs向成骨细胞分化的诱导条件。方法从因正畸或阻生拔除的第一前磨牙或第三磨牙中进行牙髓的提取,通过酶消化法和过滤法获得单细胞悬液,之后再采用有限稀释法对分离出来的原代DPSCs进行培养,克隆化培养,对基质细胞抗原(stromal cell antigen-1,STRO-1)的表达进行检测。MTT法检测SHH因子对细胞增殖能力的影响,通过RT-PCR实验进行成骨向特异的基因I型胶原(type-I collagen,COL-I)表达的检检,利用透射电镜进行诱导前后的细胞超微结构的观察。结果克隆来源细胞的STRO-1表达阳性。人牙髓干细胞经SHH因子体外诱导表现出成骨细胞特性,碱性磷酸酶和VonKossa染色结果均为阳性,RT-PCR检测成骨分化相关基因I型胶原(COL-I)仅诱导组有阳性表达。结论 SHH可以在体外有效诱导人DPSCs转化为成骨细胞。